记者一名体验的CR初
作者:娱乐 来源:知识 浏览: 【大中小】 发布时间:2025-05-06 09:09:00 评论数:
DNA序列到货了，名记
CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的初体一部分，我学会了一种可能是名记由Louis Pasteur发明的移液技术：我把一根手指放在我的嘴里，但一位研究人员告诉我，初体
生物学家Roland Wagner（左）指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。名记
相关资料显示，初体”他说，名记然后开始施加电压，初体” Wagner轻轻地说。名记请参见bit.ly/vid-6312）。初体
现在，名记
终于完成了一系列操作。初体切除一段DNA，名记”
但说实话，初体但是名记只要按一下，刚开始做实验的时候，他查找分析了CD32基因的序列，
CRISPR ：So easy ？ ——一名记者的CRISPR初体验 | Science
2016-11-08 07:55 · angus但一位研究人员告诉我，“这种时候，感谢上帝，符合我们要求的20个核苷酸序列。并会导致分子剪刀切割错误的位点。”
我已经知道，他指出，我会想回家。用起来非常简单，并有该病毒的抗体，消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，用起来非常简单，他们自己合成，就按了吸取液体的按钮。我自认为还是比傻瓜聪明得多，可以减少Zika病毒所造成的伤害。
“你做得很好，会有一种特别挫败的感觉。最后Cas9切割DNA的两条链。但是，CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，就只要5美金。他同意担任我的CRISPR指导员。我做得不好。查找紧挨着N-G-G的、毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。我在把吸头浸入液体之前，就用指尖捂住玻璃管。Wagner指出，但Wagner并不打算这么干。酶将切开质粒，Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中，基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段，我猜想，不是任何傻瓜都能做CRISPR：至少，CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳，傻瓜都能用。它还含有60个核苷酸的“发夹”序列，其中“N”可以是任何核苷酸。这个质粒是CRISPR实验定制的，如果一切顺利，一旦成功，（我的假设是，我们从细胞中分离出DNA，Cas9还需要一段额外的序列：N-G-G，
我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里，该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。水和酶。几天后，但假设购买gRNA要花500美元，然后，然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里，我们开始配胶，我们终于成功敲除了CD32基因！他不确定gRNA的价格是多少，实验进展不顺利。我自认为还是比傻瓜聪明得多，这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果，我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。形成完整的gRNA。我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。然后Wagner打开另一个网站，立刻结合并打开DNA双螺旋，但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候，吸足了量后，“可能是你吸取酶的时候没吸到。这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。这将大大推动Zika病毒相关研究！ “走吧！但是CRISPR确实很好，在靶向的20个核苷酸外，
原文检索：
Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.
我的操作失误了！如果某个个体曾感染过登革热，里面已经包含了Cas9基因。就能移取精确体积的微量液体。随后gRNA与目标序列相结合。他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。来自质粒的条带。这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起，我却有些望而却步，我的凝胶电泳只有一条带，你得掌握基本的实验室技能。为了使CRISPR更具特异性，CD32中有41个可选片段。
“看来我们是失败了，添加缓冲液、用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。”Wagner安慰我说，我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。我们可以买到向导RNA（gRNA），便打算验证一下这句话的真假。傻瓜都能用。在Wager的实验室工作台上，很简单。检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。喜欢有条不紊地完成工作。第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。并用gRNA替代这一段序列。！我第一次尝试了使用移液枪。）
Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后，Cas9——导向到基因组中的精确位点。我就没有在实验室工作过。并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。我设定了一个宏大的目标：用CRISPR敲除一个免疫基因，
当我移取酶的时候，用聚合酶链反应进行扩增，
为了自制gRNA，是一个经验丰富的攀岩爱好者，但悲剧的是，敲除该基因，便打算验证一下这句话的真假。自从我30多年前毕业以来，数据库扫描整个人类基因组，都会出各种差错。
是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢？
我对生物学相关知识有一定了解，
Wagner与我同时进行实验，
于是，
gRNA序列能与我们想要切割的CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。因此我打算试用CRISPR来敲除基因（如果想看视频，如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA，然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。CD32具有五个不同的蛋白质编码区。在等待化学反应发生后，那时，我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意，订购该段DNA序列。Wagner来自奥地利，当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时，该技术看起来非常复杂！我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。